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基于免疫反應(yīng)原理的POCT(體外診斷儀器、體外診斷試劑)測試裝置依據(jù)流動相的流動方式可粗略地被分為兩大類:一類為免疫滲濾技術(shù),利用多孔基質(zhì)形成反應(yīng)池,在非均相免疫測試(滲濾)中作為固相;另一類為免疫層析技術(shù),沿著多孔材料(橫流)進行分離。用于POCT檢測裝置抗體的標記物常見的有3類:膠體金標記、彩色乳膠標記、酶標記,其中尤以膠體金免疫標記技術(shù)為常用。
(1) 免疫斑點滲濾技術(shù):有特異性待測物抗原(抗體)共價結(jié)合在多孔介質(zhì)表面,通常使用醋酸纖維膜放置在吸水材料上,當樣品滴加到膜上后,樣品中的待測物質(zhì)結(jié)合到膜上的抗原(抗體)上。洗去膜上的未結(jié)合成分后,然后加入被標記的二抗并同已經(jīng)結(jié)合有一抗的分析物一起形成夾心。標記物直接可視(比如彩色乳膠或膠體金顆粒)或通過加入其他的試劑(例如酶底物)來放大可見變化。利用反射儀器閱讀產(chǎn)物的顏色變化以達到定量分析的目的。另外,還可以將純分析物包被于基質(zhì)的其他區(qū)域來建立內(nèi)控區(qū),其陽性結(jié)果表明試劑(還有裝置、二抗)的儲存和使用沒有任何問題。
(2) 免疫層析技術(shù):將金標抗體吸附于下端的玻璃纖維紙上,浸入樣品后,此金標單抗即被溶解,開始通過毛細作用隨樣品流動,若樣品中含有相應(yīng)抗原時,即形成 Ab-Ag-Ab-金復(fù)合物,當上行至中段醋酸纖維薄膜,即與包被在膜上的抗原(抗體)結(jié)合并被固定呈現(xiàn)紅色線條(陽性結(jié)果)。免疫層析技術(shù)與前者的區(qū)別在于液體的移動不是通過直向的穿流,而是基于層析作用的橫流。
在一塑料片條上依次粘貼如下組份:(1)玻璃纖維膜;(2)聚酯膜,膜上固定著干燥的金標/乳膠抗體;(3)硝酸纖維素膜,膜上包被著線條狀的抗體;(4)吸水紙。以上各組份首尾互相銜接,因此在(1)處滴加液體標本,液流即向(4)處移動。當液體到達(2)處時,金標抗體被溶解,同時與標本中的抗原反應(yīng)而形成復(fù)合物。液流繼續(xù)前移至(3),金標記的復(fù)合物再與膜上的抗體結(jié)合而呈現(xiàn)紅色的線條,多余的金標抗體繼續(xù)向前流動到質(zhì)控區(qū)域,該區(qū)域固定有抗抗體,直接捕捉未結(jié)合的二抗。
(3) 膠體金免疫標記技術(shù):氯金酸(HAuCl 4 )在還原劑作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。用膠體金標記單克隆抗體與抗原結(jié)合,可出現(xiàn)顏色變化,從而顯示待測抗原的存在。